逆转录病毒载体介导shRNA对人胚胎肾细胞中p53基因的沉默作用

• 作者: 刘扬 刘晓冬 刘树铮 徐瑞明 武宁 赵银龙 金顺子 马淑梅 龚守良
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 基因,p53 逆转录病毒载体 shRNA
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 228-231
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3010字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2006.02.015

摘要

目的:检测逆转录病毒载体介导的小发夹环RNA(small hairpin RNA,shRNA)对人胚胎肾细胞(HEK293)中p53基因的干扰作用.方法:将人H1启动子由XholⅠ和EcoRⅠ酶切位点插入CMV启动子上游,人CD4基因替代匀霉素抗性基因,作为检测标志.针对人野生型p53基因设计的shRNA被连接在H1启动子的下游,构建含有shRNA的逆转录病毒载体LTRH1-p53,即RNAi表达载体;利用流式细胞术检测逆转录病毒感染HEK293细胞72 h后细胞内P53蛋白水平的变化.结果:成功构建LTRH1-p53载体,该载体感染HEK293细胞后72 h,与感染空病毒载体LTRH1组相比,P53蛋白表达降至空病毒载体LTRH1组的69%(P＜0.01).结论:LTRH1-p53表达载体成功使p53基因沉默,shRNA表达载体的使用为基因功能研究提供有力工具.