逆转录病毒载体介导人凝血因子Ⅷ在哺乳细胞中的高效表达

• 作者: 储海燕 戚正武 李志广 王学锋 王振义 王鸿利 璩斌 郭雪梅
• 来源期刊: 中华医学杂志(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录病毒载体 人凝血因子Ⅷ 基因表达
• 年，卷（期）: 2001,（7）
• 所属期刊栏目: ORIGINAL ARTICLES
• 页码范围: 690-693
• 页数: 4页
• 分类号: R37
• 语种: 英文
• DOI: 10.3760/j.issn:0366-6999.2001.07.005

摘要

目的建立逆转录病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)体外高效表达体系.方法将一B区缺失(760aa～1639aa)的人FⅧ cDNA(FⅧcDNA BD)克隆至逆转录病毒载体pLNCX,构建了重组表达载体LNC-ⅧBD.经PA317细胞包装后,感染多种靶细胞.分别采用一期法、ELISA法和RT-PCR检测细胞培养上清中人FⅧ的凝血活性(FⅧ∶C)和抗原含量(FⅧ∶Ag)以及细胞中FⅧcDNA BD的转录.结果重组逆转录病毒载体LNC-ⅧBD在四种靶细胞中有不同程度的表达.其中以NIH3T3细胞的表达最高,FⅧ∶C为1.6?U/106细胞*24?hrs-1,FⅧ∶Ag为500?ng/106细胞*24?hrs-1.CHO细胞表达的FⅧ∶C活性为0.12?U/106细胞*24?hrs-1,FⅧ∶Ag为62.4?ng/106细胞*24?hrs-1.FⅧ在Cos-7和一正常成人肝细胞系L-02中表达较低.RT-PCR可检测到靶细胞中人FⅧcDNA BD的转录的mRNA.结论逆转录病毒载体能够介导人FⅧ的体外高效表达,为血友病A的基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王振义		3	8	1.0	2.0
2	戚正武		12	78	6.0	8.0
3	王学锋		2	9	2.0	2.0
4	王鸿利		7	32	4.0	5.0
5	储海燕		2	13	2.0	2.0
6	郭雪梅		1	7	1.0	1.0
7	璩斌		1	7	1.0	1.0
8	李志广		1	7	1.0	1.0