固始鸡白细胞介素2基因的克隆、表达及其表达蛋白活性的检测

• 作者: 卢中华 孙桂荣 宋素芳 康相涛 李国喜 李守义 王彦彬 韩瑞丽
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 固始鸡 白细胞介素2 原核表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 动物科学与动物医学
• 页码范围: 66-71
• 页数: 6页
• 分类号: S858.312.4|Q78
• 字数: 4022字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-9387.2006.05.015

摘要

参照GenBank上已发表的鸡白细胞介素2序列设计引物,运用RT-PCR技术,从经ConA诱导的20～35日龄固始鸡脾细胞总RNA中扩增出目的片段IL-2基因,将其插入到pGEM-T载体上,构建了克隆质粒pGEM-T-chIL-2.测序结果表明,本试验克隆的固始鸡白细胞介素2基因与GenBank上已发表的序列相比,存在2个核苷酸变异.重新设计表达引物,以克隆质粒pGEM-T-chIL-2为模板PCR扩增表达片段,对表达片段进行Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切,连接到作同样双酶切的pET28a表达载体上,鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行IPTG诱导表达,然后对表达产物进行SDS-PAGE电泳鉴定,结果表明,表达蛋白主要以包涵体的形式存在,表达蛋白分子质量约为18 ku;目的蛋白表达量占总量的18%.体外活性检测表明,重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性.