人端粒酶反转录功能区基因的构建及其在大肠杆菌中的表达和纯化

• 作者: 刘北一 庞建新 徐江平 苗佩宏 郑山根
• 来源期刊: 武警医学
• 学科: 医学
• 关键词: 端粒酶 端粒酶反转录酶 基因表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 88-92
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3594.2006.02.002

摘要

目的表达并纯化出包含所有功能基序的端粒酶催化亚基(hTERT)融合蛋白,为深入研究端粒酶作用机制、制备抗hTERT抗体和肽库筛选以端粒酶为靶的小分子抑制剂奠定基础.方法自行设计引物,以pLPC-hTERT为模板扩增出包括端粒酶发挥反转录功能所需的全部8个基序长为1 310 bp的基因片段,将PCR扩增的此片段克隆至带有6个连续组氨酸标签的原核表达载体pET-32a中,IPTG诱导表达后,用SDS-PAGE和Western-Blot(WB)检测确定表达出端粒酶反转录酶功能区融合蛋白,以8 M尿素溶解以包涵体形式存在的目的蛋白,用金属鳌合层析柱纯化融合蛋白并对之进行复性.结果经PCR、酶切、测序、SDS-PAGE和WB鉴定证实成功构建了表达质粒pET32a-hTERT,鉴定和测序结果亦证实包含全部8个基序的基因片段,凝胶电泳和WB确认表达出特异性的目的蛋白条带.结论成功构建pET32a-hTERT表达质粒,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得特异性的hTERT重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐江平	南方医科大学基础部药理教研室	120	965	14.0	25.0
2	庞建新	南方医科大学基础部药理教研室	43	428	10.0	20.0
3	刘北一	南方医科大学基础部免疫教研室	19	48	4.0	6.0
4	郑山根	南方医科大学基础部免疫教研室	3	10	2.0	3.0
5	苗佩宏	武警浙江总队医院药械科	20	168	8.0	12.0