tTS/rtTA系统下调目的基因基础表达的细胞模型研究

• 作者: 帅丽芳 张若霜 赵勇 陈系古
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 四环素调控系统 tTS沉默子 诱导表达 HepG2细胞
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 361-364
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 2949字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2006.04.001

摘要

[目的]构建带有肝脏特异性启动子和tTS沉默子的四环素调控系统,观察其在人HepG2细胞内的表达,建立严密型四环素调控系统的HepG2细胞模型.[方法]通过二次分子克隆构建重组真核表达质粒载体pliv7-rtTA-tTS-Neo,用脂质体法将质粒pliv7-rtTA-tTS-Neo及pliv7-rtTA-Neo转染人HepG2细胞,经G418筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化,克隆扩增后瞬时转染pTRE-Luc质粒,强力霉素(1 mg/L)诱导表达后检测荧光素酶活性,挑选出低背景和高诱导表达的HepG2细胞克隆.[结果]带有tTS的细胞株其诱导倍数明显高于不带有tTS的细胞株(192:21),其中克隆9的诱导倍数最高(256),获得1株高表达、低背景的HepG2/pLiv7-rtTA-tTS-Neo细胞株.[结论]荧光素酶活性检测结果验证了tTS对四环素调控系统的内在泄露问题有一定的抑制作用,使四环素调控系统的开关具有真正意义上的严密性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈系古	中山大学实验动物中心	48	319	9.0	15.0
2	赵勇	中山大学实验动物中心	28	52	4.0	5.0
3	张若霜	中山大学实验动物中心	4	10	2.0	3.0
4	帅丽芳	吉林大学生物化学教研室	2	11	2.0	2.0