插入甘氨酸对HIV Tat-胸苷激酶融合蛋白生物学活性的影响

• 作者: 余祖江 李晓菲 江河清 赵杰 阚全程
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甘氨酸 胸苷激酶 Tat 重组融合蛋白质类 细胞内化作用
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 244-248
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 4294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2006.03.004

摘要

目的:探讨插入甘氨酸(Gly)对HIV Tat-TK融合蛋白功能的影响.方法:利用基因重叠(gene splicing by overlap extension, gene SOEing)PCR技术,将不同长度的甘氨酸密码子(0、2、4、6个)插入HIV Tat-TK融合基因,经转染、鉴定证实后诱导表达,并经偶联Tat单克隆抗体的Sepharose CL-4B亲和层析柱纯化.4种HIV Tat-(Gly)n-TK系列融合蛋白(n=0、2、4、6)、HIV Tat蛋白、TK蛋白(1 μg/ml)分别与HepG2细胞在普通培养基共培养24 h后,间接免疫荧光检测各自透过细胞膜效率;在加入更昔洛韦的培养基培养3 d后,锥虫蓝染色计算细胞死亡率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:精确克隆出HIV Tat-(Gly)n-TK系列融合基因,成功表达HIV Tat-(Gly)n-TK系列融合蛋白以及HIV Tat和TK蛋白.HIV Tat-(Gly)n-TK系列融合蛋白与HIV Tat蛋白透过细胞膜的效率相似,但单独TK蛋白无法进入细胞;在含有更昔洛韦的培养基中HIV Tat-(Gly)4-TK融合蛋白致HepG2细胞凋亡率最高(14.77%),其余依次为HIV Tat-(Gly)2-TK融合蛋白(12.69%)、HIV Tat-TK(8.31%)、HIV Tat-(Gly)6-TK(4.36%)和HIV Tat 组(1.03%),组间均有显著性差异(P<0.05);细胞死亡率也发现类似的结果(分别为80.2%、65.4%、58.4%、56.7%、9.1%,组间有显著差异,P<0.05).结论:插入2、4、6个甘氨酸对HIV Tat-TK融合蛋白上游Tat蛋白的细胞融合穿透功能不产生影响,而对融合蛋白下游TK蛋白介导的更昔洛韦的细胞毒作用干扰较大,其中插入4个甘氨酸对TK蛋白介导的更昔洛韦的细胞毒作用影响最小.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阚全程	郑州大学第一附属医院药剂科	129	657	13.0	21.0
2	江河清	郑州大学第一附属医院感染科	68	192	6.0	9.0
3	余祖江	郑州大学第一附属医院感染科	170	476	10.0	13.0
4	赵杰	郑州大学第一附属医院药剂科	111	572	14.0	21.0
5	李晓菲	郑州大学第一附属医院药剂科	16	46	4.0	6.0