编码N端截短的IκBα突变体重组腺病毒的构建与鉴定

• 作者: 周林福 朱毅 朱自路 殷凯生
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 克隆,分子 IκBα突变体 NF-κB 腺病毒科 基因疗法 哮喘
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1802-1807
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4918字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2006.09.031

摘要

目的:通过去除N端丝氨酸32/36磷酸化位点,获得人胎盘组织IκBα突变体(IκBαM)基因,构建其复制缺陷型重组腺病毒(AdIκBαM),并进行体外表达和活性检测.方法:PCR定点克隆IκBαM基因(203-1003bp),亚克隆至pShuttle和pGEM-T,进行PCR、双酶切、DNA测序和同源性分析.将重组质粒pShuttle-IκBαM中含CMV启动子、IκBαM cDNA和PolyA信号的表达单元定向插入Ad5腺病毒载体,构建成重组腺病毒AdIκBαM,再经脂质体介导共转染293细胞进行包装.Western blotting检测AdIκBαM在293细胞中蛋白表达情况,电泳迁移率实验观察AdIκBαM抑制佛波酯诱导的ECV304细胞核因子κB(NF-κB)激活的作用.结果:成功克隆长801 bp的新型IκBαM基因,与GenBank中登陆的IκBα基因(接受号M69043)相应核苷酸序列一致.所制备的AdIκBαM滴度为4.0×1012pfu/L.AdIκBαM介导IκBαM基因在293细胞中表达,并以剂量依赖性方式显著抑制佛波酯诱导的ECV304细胞NF-κB活化.结论:AdIκBαM有效介导IκBαM基因表达并特异性抑制NF-κB活性,有望应用于哮喘的基因治疗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	殷凯生	南京医科大学第一附属医院呼吸内科	385	3058	25.0	37.0
2	朱毅	南京医科大学第一附属医院呼吸内科	38	178	8.0	11.0
3	周林福	南京医科大学第一附属医院呼吸内科	62	389	10.0	17.0
4	朱自路	南京医科大学生物化学与分子生物学系	8	16	2.0	4.0