C反应蛋白质粒的构建表达及纯化

• 作者: 周新 夏勇 姜新强 尹志农 胡汉宁 赵磊 郑芳
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: C反应蛋白 基因表达 Western印迹杂交
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 827-829
• 页数: 3页
• 分类号: Q5
• 字数: 2276字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2006.09.018

摘要

目的 在大肠埃希菌中表达和纯化C反应蛋白(CRP),并鉴定纯化蛋白的免疫反应性,为CRP的检测打基础.方法 应用逆转录(RT)PCR方法,从人肝细胞文库中扩增人C反应蛋白cDNA基因片段,与表达质粒载体pCRT7/NT TOPO重组,获得表达质粒CRP-pCRT7/NT.用氨苄青霉素平板筛选转化子,双酶切与DNA测序鉴定CRP基因表达质粒pCRT7/NT TOPO载体的整合状态,用IPTG诱导表达,并经组氨酸亲和层析柱纯化获得CRP的蛋白纯品.采用Western印迹的方法鉴定纯化蛋白的免疫反应性.结果 利用表达载体pCRT7/NT TOPO载体表达的含6个组氨酸标签的CRP,在SDS-PAGE上出现1条相对分子质量约30 000的阳性条带,经组氨酸亲和层析柱纯化后用Western印迹杂交证实为目的蛋白.结论 成功地构建了在大肠埃希菌表达CRP的质粒,建立了蛋白纯化的系统,为下一步CRP检测试剂盒的制备打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周新	武汉大学中南医院基因诊断中心	191	1214	16.0	27.0
2	赵磊	武汉大学中南医院基因诊断中心	43	512	13.0	22.0
3	郑芳	武汉大学中南医院基因诊断中心	106	420	10.0	15.0
4	胡汉宁	武汉大学中南医院基因诊断中心	52	354	10.0	16.0
5	夏勇	武汉大学中南医院基因诊断中心	7	44	4.0	6.0
6	姜新强	武汉大学中南医院基因诊断中心	7	9	1.0	2.0
7	尹志农	北京微创医院暨同济大学微创医院实验中心	1	1	1.0	1.0