幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白分子内佐剂融合疫苗的构建、纯化及活性研究

• 作者: 张卫军 邹全明 高原
• 来源期刊: 中国药业
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 中性粒细胞激活蛋白 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 疫苗 分子内佐剂
• 年，卷（期）: 2006,（18）
• 所属期刊栏目: 药物研究
• 页码范围: 11-13
• 页数: 3页
• 分类号: R392.33
• 字数: 4524字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-4931.2006.18.005

摘要

目的 构建幽门螺杆菌(HP)中性粒细胞激活蛋白基因(napA)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labile enterotoxin B subunit,LTB)的分子内佐剂融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础.方法 利用分子克隆技术构建携带napA-LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b-napA-LTB,转化E.coli BL21(DE3),进行原核表达,重组表达蛋白采用亲和层析柱Chelating Sepharose进行纯化,Tris-Tricine电泳和Western blot鉴定,GM1-ELISA检测rNAP-LTB与神经节苷脂的结合.口服免疫BALB/c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性.结果 重叠延伸PCR扩增出了约760 bp的napA-LTB融合基因,其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致.重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的30%,Tris-Tricine初步测定目的 蛋白的相对分子质量(Mr)约29 000,纯化后纯度大于90%.Western blot检测其具有良好的抗原性.该重组蛋白保持了与GM1神经节苷脂结合的生物学活性.动物实验表明,分子内佐剂疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG,IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显著高于无佐剂单一亚单位疫苗.结论 所获得的重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹全明	第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	258	1589	19.0	26.0
2	张卫军	第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	58	319	11.0	13.0
3	高原	第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	7	21	3.0	4.0