肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建表达

• 作者: 刘艳青 易勇 毛旭虎 王庆旭 邹全明
• 来源期刊: 解放军检验医学杂志
• 关键词: 肠血性大肠杆菌(EHEC)O157 H7 Ⅲ型分泌蛋白EspA 紧密粘附索 C-端免疫保护性片断(IntiminC300) 融合蛋白 疫苗
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 方法与评价
• 页码范围: 62-67
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

目的 构建表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 Ⅲ型分泌蛋白EspA与紧密粘附素C-端免疫保护性片断(IntiminC300)的融合蛋白(EspA-IntiminC300).方法 采用PCR技术从EHEC O157:H7基因组中扩增EspA的编码基因espA及IntiminC300的编码基因eaeC300,T-A克隆后依次构建至表达载体pET-28a(+),转化宿主细胞E.coli BL21 (DE3),测序鉴定,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测其表达量及表达形式,亲和层析法纯化目的 蛋白,免疫印迹分析免疫反应性.结果 PCR法H-EHEC O157:H7基因组中分别扩增出了约580bp(espA)和900bp(eaeC300)的目的 片段,将二者融合构建了重组质粒pET-28a(+)-espA-eaeC300,测序结果与理论预测值一致性为99.9%(1501/1502).融合蛋白在工程菌中表达量约40%,PAGE初步测定目的 蛋白的相对分子量(Mr)约54×103Da,破菌后电泳证实目的 蛋白主要以包涵体形式表达,包涵体洗涤后纯化,获得目的 蛋白纯度约85%.免疫印迹显示融合蛋白能分别与兔抗EspA和IntiminC300血清发生免疫反应.结论 高效表达了融合蛋白(EspA-IntiminC300),此融合蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,为研制EHEC O157:H7多亚单疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹全明	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	258	1589	19.0	26.0
2	毛旭虎	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	87	417	12.0	16.0
3	易勇	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	9	33	3.0	5.0
4	王庆旭	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	7	28	3.0	5.0
5	刘艳青	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	6	12	2.0	3.0