人颗粒溶素活性肽与小鼠白细胞介素-12共表达质粒的构建与真核表达

• 作者: 伊正君 何永林 徐蕾 朱道银 李娜 杨春
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 颗粒溶素 白细胞介素-12 真核表达
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 153-156
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3334字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2007.03.001

摘要

目的 构建能分泌表达相对分子质量为9 000的人颗粒溶素活性肽与小鼠白细胞介素-12(mIL-12)的真核共表达质粒,并检测其蛋白表达.方法 以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得相对分子质量为9 000的颗粒溶素活性肽基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,经双酶切及插入片段序列测定对质粒进行鉴定.同时,将小鼠IL-12亚克隆入pBudCE4.1另一多克隆位点,构建真核共表达质粒pBudCE4.1-S9K/mIL-12.采用RT-PCR、免疫细胞化学与Dot-ELISA法,检测颗粒溶素活性肽在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌.ELISA检测mIL-12的表达.结果 酶切、PCR及测序鉴定证实,颗粒溶素活性肽基因插入片段正确;RT-PCR和免疫细胞化学检测表明其可以在细胞中瞬时表达;Dot-ELISA检测表明颗粒溶素可分泌到细胞外.ELISA检测细胞培养上清有mIL-12表达.结论 已成功构建真核表达质粒pBudCE4.1-S9K/mIL-12,并能体外表达,为下一步利用颗粒溶素与mIL-12基因治疗肿瘤奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱道银	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	113	510	10.0	15.0
2	杨春	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	83	257	8.0	11.0
3	何永林	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	49	129	6.0	7.0
4	李娜	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	63	261	9.0	11.0
5	徐蕾	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	38	81	5.0	6.0
6	伊正君	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	24	102	6.0	7.0