小麦高分子量谷蛋白14亚基基因的PCR体系及原核表达研究

• 作者: 吴方丽 郭蔼光 金伟波
• 来源期刊: 浙江大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 小麦 14亚基 PCR体系 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 生物科学与技术
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: Q943.2
• 字数: 4568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1008-9209.2007.01.009

摘要

小麦高分子量谷蛋白14亚基(HMW-GS 1Bx14)被认为可能对面团加工品质有很大贡献的亚基.为了验证其功能,本研究欲通过PCR方法扩增14亚基基因,并使其在大肠杆菌中大量表达,为下一步用掺粉实验验证其功能奠定基础.但是由于HMW-GS 1Bx14基因由2388 bp个碱基组成,GC含量较高,并且在基因中包含约1.6 kb的重复区,所有这些都使常规PCR难以成功扩增出HMW-GS 1Bx14 基因.本研究采取以下三种措施:①设计一对高Tm值的特异引物;②采用二段法PCR反应程序;③改良PCR反应的缓冲体系、添加有机溶剂(DMSO,甜菜碱等)和Taq酶保护剂(BSA等);最后成功地扩增出目的片段.此外由于不同生物间对密码子使用存在很大差异,因此HMW-GS 1Bx14基因很难在大肠杆菌中得到有效大量的表达.本研究选用万能菌株Rosetta(DE3)plysS作为表达用菌,从而克服了不同生物间密码子使用偏爱性的问题,成功的使HMW-GS 1Bx14得到表达,为下一步研究HMW-GS 1Bx14的基因功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴方丽	西北农林科技大学生命科学学院	11	51	4.0	7.0