大鼠晚期糖基化终产物受体基因特异性小干扰RNA表达载体的构建及其活性鉴定

• 作者: 刘乃丰 夏金荣
• 来源期刊: 细胞生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 晚期糖基化终产物受体 小干扰RNA 肝星状细胞
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 723-728
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 6035字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7666.2007.05.020

摘要

应用两个RNA干扰实验技术网络的RNA设计软件,模拟SD大鼠晚期糖基化终产物受体(RAGE)mRNA的二级结构,设计针对RAGE mRNA 417、221和534位点的3对小干扰RNA(siRNA)序列(21 nt),再转化为能表达其小发夹结构RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,分别将其克隆于pGCsi-U6/Neo/GFP载体,利用酶切和序列分析鉴定克隆的正确性.将RAGE特异性siRNA表达克隆转染肝星状细胞(HSC)-T6细胞系,以空白及转染非特异性siRNA表达克隆作为对照,分别以实时荧光定量PCR和Western印迹法检测各组HSC-T6细胞RAGE基因和蛋白质的表达.结果显示:成功构建了RAGE特异性siRNA重组表达载体pGCsi-R1、pGCsi-R2、pGCsi-R3和非特异性siRNA重组表达载体pGCsi-C,与对照组相比,转染特异性siRNA重组表达载体的HSC-T6细胞的RAGEmRNA表达受到明显抑制,在0.25～1.0 nmo1/L范围内,RAGE mRNA下调幅度呈浓度依赖性增加,以1.0 nmol/L pGCsi-R1最显著,转染pGCsi-C的HSC-T6细胞的RAGE mRNA表达水平无明显变化.转染pGCsi-R1的HSC-T6细胞24、48和72 h表达的RAGE mRNA分别较空白对照组下调(79.65±8.88)%、(78.96±7.94)%和(73.11±6.89)%(F=71.397,61.824,61.98,P均＜0.01),在72 h范围内,RAGE mRNA下调幅度呈时间依赖性降低.同时,转染pGCsi-R1的HSC-T6细胞50 kDa和46kDa的RAGE、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA及蛋白质的表达也明显下调,分别为空白对照组的(43.91±1.18)%(F＝386.19,P＜0.01)、(36.33±0.78)%(F=386.07,P＜0.01)、(57.53±3.25)%(F=20.91,P＜0.05)和(58.48±3.08)%(F=56.59,P＜0.05).结果表明:pGCsi-R1表达的特异性siRNA可高效抑制HSC-T6细胞中RAGE基因和蛋白质的表达及肝星状细胞的激活.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘乃丰	东南大学附属中大医院消化科	171	1070	15.0	23.0
2	夏金荣	东南大学附属中大医院消化科	20	98	6.0	9.0