一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

• 作者: 刘美芹 卢存福 尹伟伦 沈昕
• 来源期刊: 北京林业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 固相扣除杂交 聚合酶链式反应 低温诱导基因
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 页码范围: 67-72
• 页数: 6页
• 分类号: Q785
• 字数: 6309字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-1522.2007.05.015

摘要

该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略.该策略中的所有操作步骤,包括poly(A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操作简单易行.扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料(Driver)的cDNA第一链,直接扣除加有接头的处理材料(Tester)cDNA第二链中的共有序列.多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交,能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失.最后一轮扣除后的Tester二链中,含有大量差异表达序列,用Tester二链特有的接头引物进行扩增,能进一步提高扣除效率.该文选用此扣除方法,成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆,其中有4个克隆是全长cDNA序列.经序列分析发现,这些基因都与低温相关,进一步说明,该方法可用于克隆未知差异表达基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹伟伦	北京林业大学生物科学与技术学院	165	3260	31.0	50.0
2	刘美芹	北京林业大学生物科学与技术学院	7	110	4.0	7.0
3	卢存福	北京林业大学生物科学与技术学院	36	572	12.0	23.0
4	沈昕	北京林业大学生物科学与技术学院	34	402	12.0	18.0