携强绿色荧光蛋白重组慢病毒的构建及其在原代培养SD大鼠皮层神经细胞中的表达

• 作者: 吴昊 吴江 孙欣 杨宇 杨广笑 杨欣 王全颖
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 增强绿色荧光蛋白 慢病毒属 原代培养神经细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 237-240,封2
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3295字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2007.02.012

摘要

目的:构建携带强绿色荧光蛋白的重组慢病毒(Lent/EGFP),感染原代培养SD大鼠皮层神经细胞,观察其感染能力及报告基因的表达水平.方法:采用PCR方法克隆EGFP cDNA将EGFP基因片段亚克隆到慢病毒穿梭质粒多克隆位点内;用4质粒共转染系统在293ET细胞中包装出携带EGFP基因的重组慢病毒Lent/EGFP;重组病毒感染NIH 3T3细胞,FACS检测重组病毒滴度;Lent/EGFP感染体外培养的原代SD大鼠皮层神经细胞,共聚焦荧光纤维镜观察原代神经细胞内绿色荧光蛋白的表达情况.结果:基因测序证明克隆的EGFP cDNA与GenBank提供的序列完全一致;琼脂糖凝胶电泳结果证实EGFP正确插入pLenti6/V5TOPO;FACS检测病毒滴度为2×106;在体外分离培养的原代SD大鼠皮层神经细胞中,重组病毒感染72 h后可见较强的绿色荧光蛋白表达.结论:采用改良的4质粒共转染方法成功构建了携EGFP的重组慢病毒载体;Lent/EGFP对非分裂的神经细胞具有较强的感染能力,且携带的EGFP基因可以在神经细胞内有效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴昊	吉林大学第一医院神经内科	144	523	11.0	18.0
2	杨宇	吉林大学第一医院神经内科	58	203	7.0	11.0
3	吴江	吉林大学第一医院神经内科	157	910	16.0	22.0
4	杨欣	吉林大学第一医院神经内科	18	163	8.0	12.0
5	孙欣	吉林大学第一医院神经内科	17	45	4.0	6.0
6	王全颖	吉林大学第一医院神经内科	2	12	2.0	2.0
7	杨广笑	吉林大学第一医院神经内科	2	12	2.0	2.0