TGF-β3真核表达载体转染骨髓基质干细胞促进其向软骨分化的实验研究

• 作者: 冯勇 徐亮 李进 杨述华 梅荣成 袁晓梅 郑东
• 来源期刊: 中国矫形外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转化生长因子β3克隆 软骨分化 软骨组织工程 软骨修复 真核细胞 骨髓基质干细胞
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 455-458
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4117字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8478.2007.06.017

摘要

[目的]构建生长转化因子(TGF-β3)含绿色加强绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP-TGF-β3,然后用该质粒转染骨髓基质干细胞(Marrow stromal cells,MSCs)并促进MSCs向软骨方向分化.[方法]用RT-PCR法从大鼠的胚胎组织中提取TGF-β3的DNA全长,首先连接到pMDl8-T载体,扩增、纯化后经测序公司测序确定插入目的基因序列的正确性,然后再用带有EcoRI、PstI内切酶的引物,从pMD18-T将TGF-β3的全长再次扩增出来,最后将带有酶切位点的TGF-β3的全长插入到真核质粒pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-TGF-β3.体外培养大鼠MSCs,应用阳性脂质体将pIRES2-EGFP-TGF-β3转染到MSCs中,24 h后在荧光显微镜下观察蛋白的表达,流式检测MSCs的转染效率;Westen Blot检测TGF-β3蛋白的表达;之后进行MSCs细胞球团培养,分别于第7、14、21、28 d检测软骨基质胶原Ⅱ,胶原Ⅹ和Aggrecan的表达,同时用甲苯胺蓝检测蛋白聚糖(proteoglycan)的表达.[结果]测序结果和酶切鉴定结果表明成功的构建了pIRES2-EGFP-TGF-β3质粒,转染MSCs之后,转染的效率达30%.Westen Blot结果表明TGF-β3获得了成功的表达,在接下来的细胞球团培养过程中,转染后MSCs被成功诱导向软骨分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨述华	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	562	4404	28.0	40.0
2	李进	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	111	836	15.0	23.0
3	郑东	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	14	70	6.0	7.0
4	徐亮	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	16	82	6.0	8.0
5	冯勇	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	24	182	9.0	12.0
6	梅荣成	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	10	42	4.0	6.0
7	袁晓梅	华中科技大学同济医学院基础学院免疫系	4	48	3.0	4.0