表达马传染性贫血病毒受体和荧光素酶报告基因的293细胞系的建立

• 作者: 全滟平 周建华 张淑琴 王登峰 简子建 郭巍 马学恩
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: EIAV 受体 LTR 荧光素酶 细胞系
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 侵染和免疫
• 页码范围: 1070-1075
• 页数: 6页
• 分类号: Q936|Q934
• 字数: 5529字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2007.06.024

摘要

为了在体外精确、简便地测定马传染性贫血病毒(EIAV)的中和抗体和研究不同毒株与受体的亲和性,克隆了马慢病毒受体1(ELR1)cDNA并插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了表达载体pELR1.该载体瞬时转染293细胞后,经Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测,确认了ELR1的表达.在pELR1质粒的基础上,插入EIAV疫苗株前病毒基因组转录调控区LTR以及萤火虫荧光素酶报告基因(Luc)构建了表达载体pELR1-LTR-Luc,并转染293细胞,建立了ELR1-LTR-Luc(293-E)细胞系.该细胞系能稳定表达ELR1基因,并且能在LTR的调控下表达萤火虫荧光素酶基因.用1000TCID50的EIAV驴胎皮肤细胞疫苗株D18V13接种该细胞,24h后检测其荧光素酶活性是未接毒对照的3.15倍.同时用IFA检测证明了病毒在细胞内的增殖.EIAV强毒株L21的接毒试验显示,ELR1-LTR(293-E)细胞的萤火虫荧光素酶活性与该毒株的接毒量在10-2～10-7稀释范围内呈正相关.该细胞系传35代后,外源基因的表达特征未发生改变.该细胞系的建立为进一步开展EIAV与细胞受体相互作用以及中和抗体评价等研究奠定了重要基础.