HPT-ELISA方法的建立及其在转基因水稻监测中的应用

• 作者: 叶庆富 汪海燕
• 来源期刊: 核农学报
• 学科: 农学
• 关键词: HPT蛋白 表达纯化 抗体制备 酶联免疫分析 转Bt基因水稻
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 同位素示踪·动物生理·植物生理
• 页码范围: 168-172
• 页数: 5页
• 分类号: S5
• 字数: 4262字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8551.2007.02.016

摘要

本文改进了HPT-ELISA检测法,利用一种简便并且高效的微生物表达体系,将hpt基因的全编码序列克隆到原核表达质粒pGEX-KG上,在E.Coli菌株BL21(DE3)-pLys中进行诱导表达,获得了融合蛋白GST-HPT,经Thrombin凝血酶酶切过夜,再经过柱纯化后获得不含GST且具有生物活性的HPT纯蛋白,所得蛋白纯度＞90%.MALDI-TOF-MS分析表明,HPT蛋白分子量为39.4KD.用HPT纯蛋白免疫家兔,制备了高效价的多克隆抗体,进而构建了双抗夹心酶联免疫检测方法,其灵敏度为0.31ng/ml.应用该HPT-ELISA方法,测定了不同生育期转Bt基因水稻植株中HPT蛋白的表达水平以及成熟期稻米中的HPT蛋白含量.结果表明,不同生育期转Bt基因水稻植株中HPT蛋白的表达量约为15.67～60.12 ng/g·FW,转Bt基因稻米中HPT蛋白的含量为5.28ng HPT/g·FW,而在非转基因亲本的植株和稻米中均未检测到HPT蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶庆富	浙江大学原子核农业科学研究所	62	1299	19.0	33.0
2	汪海燕	浙江大学原子核农业科学研究所	11	145	7.0	11.0