皱纹盘鲍外套膜耐维生素E缺乏消减cDNA文库的构建

• 作者: 付京花 冯秀妮 刘付志国 刘晶 张文兵 徐玮 马洪明 麦康森
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 皱纹盘鲍 外套膜 维生素E 抑制消减杂交 cDNA消减文库
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 383-389
• 页数: 7页
• 分类号: Q959.215
• 字数: 4938字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1005-8737.2007.03.006

摘要

为了克隆维生素E缺乏时皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)外套膜差异性表达的基因,本研究配制了维生素E缺乏水平(3.5 mg/kg)和正常添加水平(52.8 mg/kg)的人工饲料,喂养皱纹盘鲍幼鲍,初始体质量为(0.71±0.00)g,初始壳长为(15.49±0.04)mm,240 d后,采用抑制消减杂交法(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)构建了维生素E缺乏组与正常组外套膜组织差异表达的cDNA消减文库.经检验,差异表达的基因均被富集了25～28倍,证明构建的cDNA消减文库具有很强的消减效率.从文库中随机挑取100个白色克隆摇菌液进行PCR鉴定,95%的克隆中均有100～900 bp的插入片段,这些片段可能是维生素E缺乏差异表达基因的cDNA片段.选取含插入片段大小不同的48个克隆测序,其中有16个新基因,10个谷胱甘肽转移酶的基因,5个谷胱甘肽过氧化物酶基因,2个过氧化氢酶基因,3个羟基类固醇脱氢酶基因,4个酪氨酸激酶基因,1个类甲状腺过氧化物酶蛋白基因,3个纤维素酶基因,1个cAMP效应元件结合蛋白基因,3个贝壳生物矿化相关蛋白的基因.总的来说,利用抑制消减杂交的方法构建差异表达cDNA文库,可以比较好地反映维生素E对皱纹盘鲍影响的基因信息,为研究其他营养素对皱纹盘鲍基因表达的影响提供了基础数据.