皱纹盘鲍外套膜cDNA表达文库的构建

• 作者: 刘付治国 张文兵 张璐 徐伟 李静 艾庆辉 谭北平 马洪明 麦康森
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 皱纹盘鲍 外套膜 cDNA表达文库 生物矿化
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 744-748
• 页数: 5页
• 分类号: S917
• 字数: 4374字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5174.2008.05.008

摘要

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)的壳是生物矿化组织的杰出代表,其中的生物矿化蛋白质对其结构和性能发挥了关键性的作用.鉴于对皱纹盘鲍生物矿化功能基因信息研究的缺乏,文中采用SMART(Switching Mechanism At 5'end of RNA Transcript)技术,构建皱纹盘鲍外套膜组织的全长cDNA表达文库.按Trizol试剂盒的操作程序提取皱纹盘鲍外套膜组织总RNA,以此为模板,通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA;再以第一链cDNA产物为模板,用LD-PCR法合成双链cDNA.双链cDNA产物经SfiⅠ酶切和ChromaSpin 400柱分级分离后,与λTriplEx2载体进行连接,体外蛋白包装,即获得皱纹盘鲍外套膜cDNA原始文库.测定其滴度为1.2×106 pfu/mL,重组率为95%.PCR扩增方法测得插入cDNA片段长度在0.5～2 kb之间,平均为1.4 kb.进行文库的扩增,扩增后的cDNA文库的滴度为4×109 pfu/mL,重组率93.6%.