烟碱脱氢酶基因的原核表达及酶学特性研究

• 作者: 刘庭淼 张峻松 曾晓鹰 李庆华 马林
• 来源期刊: 中国烟草学报
• 学科: 工学
• 关键词: 烟碱脱氢酶基因(ndh) 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 60-64
• 页数: 5页
• 分类号: TS413
• 字数: 3985字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1004-5708.2007.04.012

摘要

将含烟碱脱氢酶基因重组质粒pBlueScript SK-ndh用限制性内切酶Eco RI、SpeI双酶切,目的基因再亚克隆到非融合表达质粒载体pET-17B,获得重组子质粒pET-17B-ndh,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLYS获得高酶活力表达的工程菌株.即使在不用IPTG诱导情况下,该工程菌也产生较高酶活力的可溶性酶,酶产量比野生菌A.nicotinovorans提高25倍.通过硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤提纯了烟碱脱氢酶,酶被纯化了39.82倍,SDS-PAGE分析得到电泳纯单一条带.该酶活力的最适温度为40℃,该酶组分在pH 5.5～8.0范围内稳定,最适pH 7.0,对烟碱作用的Km值为7.694×10-4 mol/L.Mn2+、Co2+是酶的激活剂,Cu2+是酶的抑制剂.烟碱降解条件研究表明在反应体系中需要辅酶或电子接受体参与介导质子(H+)的转移,该酶催化反应是一种氧化还原反应体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张峻松	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	192	1625	20.0	28.0
2	马林	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	67	381	10.0	17.0
3	刘庭淼	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	5	60	4.0	5.0
4	曾晓鹰		2	4	1.0	2.0
5	李庆华		1	4	1.0	1.0