应用载体介导的RNA干扰技术抑制Nurr1基因在PT67细胞中的表达

• 作者: 包金风 徐群渊 杨慧 赵春礼 赵焕英
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Nurr1基因 RNA干扰 载体介导
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 121-126
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7547.2007.02.002

摘要

本研究应用载体介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术特异地干扰孤儿核受体1(nuclear related factor1,Nurr1)基因的表达,以建立稳定的RNAi技术及用于下一步的Nurr1基因治疗研究.我们筛选了四对Nurr1基因的特异性序列 shRNA(short hairpin RNA),构建相应的载体(psilencerTM3.1-H1neo shRNA1, 2, 3, 4).分别将这4种质粒瞬时转染入已转染了逆转录病毒质粒pLNCX2-Nurr1并稳定表达Nurr1 基因的PT67细胞中.在转染后24、48和72 h分别采用免疫荧光、免疫组化、免疫印迹以及Real-time PCR的方法检测细胞中Nurrl蛋白及基因的表达水平.结果显示,转染psilencerTM3.1-H1neo shRNA 2、3号24 h和48 h后,经免疫荧光和免疫组化检测,Nurr1在PT67细胞中表达显著降低;免疫印迹结果也显示,Nurr1蛋白量明显低于阴性对照组.psilencerTM3.1-H1neo shRNA 1、4对Nurr1蛋白表达没有明显影响.Real-time PCR 相对定量结果也同样证实2、3号转染后Nurr1基因表达的干扰效果明显,而1、4号结果相对较弱.通过本实验,我们筛选出了两段Nurr1特异性siRNA序列,且干扰效果在转染后24 h至48 h时效果最为明显.