9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达

• 作者: 伊正君 何永林 张黎 徐蕾 朱道银 杨春
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 颗粒溶素 真核表达质粒 重组减毒沙门菌
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 441-444
• 页数: 4页
• 分类号: R730.59
• 字数: 3407字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.05.005

摘要

目的 构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础.方法 以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR、双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌;重组质粒电转化减毒沙门菌后,将重组菌感染巨噬细胞,以RT-PCR检查颗粒溶素的表达.结果 成功扩增出含分泌肽编码基因的9 ku的颗粒溶素基因片段;经酶切,PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒;转染细胞证实可分泌表达9 ku颗粒溶素;重组减毒沙门菌感染细胞后,检测到颗粒溶素的表达.结论 成功构建含9 ku颗粒溶素活性肽基因的重组减毒沙门菌,该菌能成功递呈携带基因在感染细胞内表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张黎	重庆医科大学免疫学与微生物学教研室	58	140	6.0	8.0
2	朱道银	重庆医科大学免疫学与微生物学教研室	113	510	10.0	15.0
3	杨春	重庆医科大学免疫学与微生物学教研室	83	257	8.0	11.0
4	何永林	重庆医科大学免疫学与微生物学教研室	49	129	6.0	7.0
5	徐蕾	重庆医科大学免疫学与微生物学教研室	38	81	5.0	6.0
6	伊正君	重庆医科大学免疫学与微生物学教研室	24	102	6.0	7.0