口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建

• 作者: Ma Mingxiao 刘慧娟 沈国顺 郑敏 金宁一 金明兰 霍晓伟 马海利 马鸣潇 鲁会军
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 农学
• 关键词: 复合多表位抗原 表达盒 OAAT口蹄疫病毒 鸡痘病毒
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 288-294
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 字数: 5958字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2007.03.013

摘要

针对我国口蹄疫(FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT.该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaI型FMDV 2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因(其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株)作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因.将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒(FPV)表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子(P7.5)下游,构建了携带OAAT表达金和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDV VP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础.