共表达Asia1口蹄疫病毒P1-2A-3C基因和猪IL-18基因重组鸡痘病毒构建及表达

• 作者: 任静强 常巧呈 金宁一 金扩世 霍晓伟 鲁会军
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: Asia1口蹄疫病毒 鸡痘病毒载体 P1-2A基因 3C基因 IL-18基因 表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 30-35
• 分类号: S852.659.6|Q7
• 字数: 3480字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2011.06.007

摘要

为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A-3C片段与pUTAL-IL18片段连接起来,构建鸡痘病毒中间转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-IL18。通过脂质体转染法,将pUTAL-P1-2A-3C-IL18与鸡痘病毒282E4株共感染染鸡胚成纤维细胞（chicken embryo fibroblasts,CEF）,通过BrdU三次加压筛选,筛选出重组鸡病毒株vUTAL-P1-2A-3C-IL18。经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C基因。本研究为研制安全、高效的亚洲Ⅰ型FMD重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。