表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株的构建及筛选

• 作者: 吴国华 吴磊 张云德 张强 朱彩珠 朱海霞 李健 王建科 邵长春 颜新敏
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 启动子P7.5 P1-2A-3C基因 羊痘病毒
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 434-440
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 5372字
• 语种: 中文

摘要

为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到K pn I酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFPLP7.5-P1-2A-3C.重组载体通过缺失的TK基因与羊痘病毒弱毒株在BHK-21细胞中同源重组,用EGFP作为标记筛选出重组毒株,并进行PCR鉴定、抗原捕获ELISA试验检测及Western blot分析.结果显示该重组弱毒株能在1～10代BHK-21细胞中稳定传代,扩增出约3 000 bp片段,并经测序确证为基因P1-2A-3C;抗原捕获ELISA试验检测均为阳性;Western blot分析表明转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C在感染的GTPV AV41 BHK-21细胞中表达的蛋白可被O型FMDV高免血清特异性识别,并具有反应原性.这些结果表明获得了表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的重组山羊痘弱毒株.