用SMART技术构建猪蛔虫雌虫cDNA文库

• 作者: 吴绍强 宋慧群 朱兴全 林瑞庆 邓艳 魏冬霞
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪蛔虫雌虫 cDNA文库 SMART技术
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 180-184
• 页数: 5页
• 分类号: S852.71|Q781
• 字数: 3892字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2007.03.006

摘要

为克隆出与猪蛔虫产卵或发育相关基因的全长序列,本研究根据SMART(Switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,采用Clontech公司的CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction Kit构建了猪蛔虫雌虫的全长cDNA文库.用TriPure Isolation Reagent和Poly(A)PuristTM试剂盒提取mRNA后,以逆转录酶PowerScriptTM反转录合成第一链cDNA,然后通过LD-PCR合成并扩增ds eDNA.扩增产物经纯化、Sfi Ⅰ酶切、过CHROMA SPIN-400TM柱去除小片段后,连接到Sfi Ⅰ消化过的pDNR-LIB(带有Sfi Ⅰ A和B两个位点)质粒载体中,最后用电转化法将重组质粒转化到E.coli DH5α内得到原始文库,扩增后的文库保存在96孔细胞培养板中.经测定,构建的cDNA文库约含有1.6 ×106个重组子,重组效率迭100%,插入片段多在0.4 kb～2 kb之间,平均插入片段长度约1.2 kb,扩增后文库滴度为3×109CFU/mL.结果表明猪蛔虫雌虫的全长eDNA文库已构建成功,从而为筛选猪蛔虫雌虫的功能基因全长序列奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林瑞庆	华南农业大学兽医学院	127	1096	19.0	26.0
2	朱兴全	华南农业大学兽医学院	127	1286	20.0	27.0
3	宋慧群	华南农业大学兽医学院	49	519	15.0	19.0
4	魏冬霞	华南农业大学兽医学院	9	27	3.0	5.0
8	邓艳	华南农业大学兽医学院	8	82	6.0	8.0
9	吴绍强	华南农业大学兽医学院	17	305	10.0	17.0