蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2基因的克隆、表达及活性鉴定

• 作者: 吴伟康 巫国勇 程超 罗红鹤 郭爱林 钟佛添
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白酪氨酸磷酸酯酶 基因克隆 表达 纯化 质谱
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 137-141
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4121字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2007.02.004

摘要

[目的]获取人蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2(PTP4A2)基因并高效表达纯化,对于产物的体外活性进行测定.[方法]用RT-PCR技术,从肝癌细胞系HepG2的总RNA中,获得编码PTP4A2基因功能片段的DNA.测序后,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达载体,并导入大肠杆菌E.coli BL21中,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白.对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化,western印记进行鉴定,质谱检测蛋白分子量.通过其对底物磷酸多肽的去磷酸化反应,鉴定其活性.[结果]获得编码肝癌细胞PTP4A2(全长氨基酸)的基因序列,测序结果与已发表的基因序列相一致.重组GST融合蛋白经western分析,在相对分子质量Mr=45 000处,有特异的蛋白条带.重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,质谱检测其分子量为45 470.6.底物多肽去磷酸化反应表明纯化产物具有较强活性.[结论]成功克隆人PTP4A2基因,并在E.coli BL21中高效表达,亲和层析后获得高纯度GST融合蛋白,质谱检测分子量与预期结果一致,纯化产物具有蛋白磷酸酯酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟佛添	中山大学附属第一医院胸外科	42	191	8.0	11.0
2	罗红鹤	中山大学附属第一医院胸外科	70	251	8.0	11.0
3	吴伟康	中山大学基础医学院病理生理教研室	154	2190	28.0	36.0
4	巫国勇	中山大学附属第一医院胸外科	49	188	8.0	10.0
5	程超	中山大学附属第一医院胸外科	36	144	6.0	9.0
6	郭爱林	广东省人民医院医学研究中心	27	105	5.0	9.0