铜绿假单胞菌的LexA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与纯化

• 作者: 刘芳 唐晖 查庆兵 汤绍辉 沙建平 陈炫
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 LexA 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 379-384
• 页数: 6页
• 分类号: R378.99
• 字数: 5112字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2007.04.012

摘要

目的:对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的阻遏蛋白LexA进行基因克隆、重组表达及蛋白纯化.方法:采用PCR法从PAO1株基因组中扩增出1 086 bp的LexA基因,将此基因片段插入到表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.包涵体洗涤后用8 mol/L尿素溶解,以镍离子亲合柱层析作为第1步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第2步精细纯化,反相高相液相色谱法(HPLC)测定蛋白的浓度.结果:LexA以包涵体形式表达,表达量为45%,经镍离子亲合柱层析纯化后LexA蛋白纯度达到85%以上,回收率大于80%,镍离子亲合柱层析和凝胶过滤层析两步纯化目的蛋白,经HPLC测定,最终目的蛋白的纯度为98.97%.结论:在pET32a(+)表达系统中实现了PA的LexA蛋白的高效表达,两步纯化法获得高纯度的目的蛋白,为进一步鉴定LexA靶位点奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤绍辉	暨南大学附属第一医院临床实验中心	164	444	9.0	14.0
2	刘芳	暨南大学附属第一医院临床实验中心	44	201	7.0	12.0
3	查庆兵	暨南大学附属第一医院临床实验中心	28	71	4.0	7.0
4	陈炫	暨南大学附属第一医院临床实验中心	13	59	4.0	7.0
5	唐晖	暨南大学附属第一医院临床实验中心	12	47	4.0	6.0
6	沙建平	第三军医大学临床微生物免疫教研室	5	20	2.0	4.0