PCR-RFLP和PCR-SSCP方法对弱精子症精子mtATPase6基因突变的检测

• 作者: 吕建新 张春玲 张李雅 李玮 楼哲丰 金龙金 陈林丽
• 来源期刊: 细胞生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弱精子症 mtATPase6 点突变 PCR-RFLP PCR-SSCP
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 573-578
• 页数: 6页
• 分类号: R6
• 字数: 3614字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7666.2007.04.024

摘要

为了检测弱精子症精子mtATPase6基因突变,采用PCR方法扩增了17例弱精子症mtDNA 8 602～9 416区域815 bp目的片段,用MspⅠ和HaeⅢ限制性内切酶酶切,分别用琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和单链构像多态性(SSCP)筛查突变.筛选出3例突变标本,经测序确认突变位点和突变性质.结果显示17例标本全部扩增出mtDNA 8 602～9 416的815 bp目的片段,PCR产物经MspⅠ限制性内切酶酶切后电泳结果与剑桥序列预期酶切图谱相一致.PCR产物经HaeⅢ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上出现泳动带的异常,在17例弱精子症中共筛选出2例酶切片段异常标本.PCR-HaeⅢ酶切产物的SSCP电泳图谱分析结果显示,在PCR-RFLP(HaeⅢ)电泳图谱正常的15例弱精子症标本中筛选出1例异常.两种方法在弱精子症精子标本中筛选出mtATPase6基因突变3例(3/17,17.7%).3例测序结果发现A8701G、C8943T、C8964T、T8966C、G9053A、C9060A、C9075T、A9120G、C9296T共9个点突变,其中A8701G、T8966C、G9053A三个突变为错义突变,其余均为同义突变.上述结果提示,弱精子症精子mtATPase6基因存在较高突变率;PCR-RFLP和PCR-SSCP能简单、快速、灵敏地筛选mtATPase6基因突变.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕建新		153	1535	21.0	32.0
2	楼哲丰	温州医学院生命科学学院生物学实验中心	22	160	8.0	11.0
3	金龙金	温州医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室	38	253	9.0	14.0
4	张李雅	温州医学院附属第一医院生殖医学中心	14	93	6.0	9.0
5	张春玲	温州医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室	1	14	1.0	1.0
6	陈林丽	温州医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室	1	14	1.0	1.0
7	李玮	温州医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室	2	14	1.0	2.0