猪源产毒素多杀性巴氏杆菌HN-13株外膜蛋白H的基因克隆与特征

• 作者: 吴斌 周锐 张四化 李健 李良军 陈焕春 黎璐
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多杀性巴氏杆菌 外膜蛋白H 克隆 表达 结构预测
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 183-191
• 页数: 9页
• 分类号: S188
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2007.02.001

摘要

传染性萎缩性鼻炎是养猪业中的一种重要的呼吸道传染病,产毒素多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是其重要的病原之一,外膜蛋白H(OmpH)在该菌的致病和免疫中发挥重要作用.以产毒素多杀性巴氏杆菌血清D型菌株HN-13基因组为模板,扩增了ompH基因1 020bp编码区,经过序列测定和生物信息学分析,发现OmpH蛋白具有典型的膜通道蛋白的特征.将ompH基因克隆到原核表达载体pET-28a中构建了重组表达质粒pET-ompH,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导,实现了高效表达,表达产物主要以包涵体的形式存在.用纯化的重组蛋白免疫家兔制备OmpH的抗血清,Western杂交显示抗血清能够与菌体蛋白发生特异性反应.以重组OmpH为包被抗原建立了间接ELISA方法,方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为2.89μg/mL,用56份参考阴性猪血清确定阴阳界限值为0.36(OD630).用建立的ELISA方法对192份临床猪血清样品进行检测,结果显示OmpH抗体阳性率为51.6%(99/192),阴性率为48.4%(93/192).研究为OmpH的进一步应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈焕春	农业微生物学国家重点实验室动物病原分室	331	4866	36.0	53.0
3	吴斌	华中农业大学动物医学院	104	1687	21.0	36.0
4	李良军	农业微生物学国家重点实验室动物病原分室	1	13	1.0	1.0
5	黎璐	农业微生物学国家重点实验室动物病原分室	1	13	1.0	1.0
6	李健	农业微生物学国家重点实验室动物病原分室	1	13	1.0	1.0
7	张四化	农业微生物学国家重点实验室动物病原分室	1	13	1.0	1.0
10	周锐		2	20	2.0	2.0