HPVl8 E7联合SLC基因疫苗的构建及在真核细胞中的表达

• 作者: 刘朝奇 张昌菊 曾凡惠 朱平 柳长柏 王艳林 雷小敏
• 来源期刊: 中国药理通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒18 肿瘤 脱氧核糖核酸疫苗 ECV细胞
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 页码范围: 36-37
• 页数: 2页
• 分类号: R73-36

摘要

目的：构建人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）18型E7联合小鼠次级淋巴组织趋化因子（Secondary lymphoid tissue chemokine，SLC）真核共表达基因，以获得高效性治疗HPVl8感染及相关肿瘤的DNA疫苗。方法：分别以HPVl8型的中国野毒株、pDsRed2-N1-SLC为模板，利用PCR克隆技术制备HPVl8E7和SLC基因，分别双酶切后胶回收获得HPVl8E7、SLC基因片段，分别插入到真核表达载体pIRES的多克隆位点B（MCSB）和多克隆位点A（MCSA）中，构建pIRES-E7-SLC真核共表达质粒。酶切及核酸序列分析鉴定质粒。脂质体转染人脐静脉内皮细胞（ECV）细胞，以Western bolt方法鉴定真核表达质粒E7的表达，用ELISA的方法鉴定真核表达质粒SLC的表达。结果：酶切及核酸序列测定表明真核表达质粒pIRES-E7-SIC的成功构建。RT-PCR和Western-Blotting方法证实E7及SLC蛋白在真核细胞的正确表达。结论：成功地构建真核表达质粒plRES-E7-SLC，用它转染ECV细胞后，能表达E7和SLC蛋白，为下一步研究HPVl8感染及相关肿瘤疫苗奠定了基础。