真核表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建及其在NIH 3T3细胞株中的表达

• 作者: 俞康 单大铭 吴建波 梁彬 沈志坚 胡永仙 谭映霞 钱红兰
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗体 肿瘤 基因疗法 基因表达 NIH 3T3细胞
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1832-1836
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 4074字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.09.038

摘要

目的:构建pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的重组真核表达载体,并在NIH 3T3细胞株中表达.方法:采用DNA重组技术把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/IgGFc/CD80的真核表达载体pLNCX质粒上,转染NIH 3T3细胞株,经G418筛选细胞,用RT-PCR、流式细胞术检测目的基因表达情况.结果:经菌落PCR、酶切及一次测序鉴定均证实pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的成功构建;经RT-PCR法,能够从转染的NIH 3T3细胞中扩增出1条与目的基因大小一致的DNA片段,流式细胞术检测显示该目的基因能够在NIH 3T3细胞中表达目的蛋白.结论:重组表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建,并在NIH 3T3细胞株中的成功表达,为该重组质粒转染原代T淋巴细胞从而制备CD20靶向性嵌合锚定T细胞奠定了基础.