PTEN表达载体的构建及转染食管鳞癌细胞系EC9706

• 作者: 侯桂琴 刘兰琦 田芳 范天黎 薛乐勋 许培荣 鲁照明
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: PTEN 食管鳞癌 mTOR 转染
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 178-181
• 页数: 4页
• 分类号: R735.1
• 字数: 2938字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2007.03.005

摘要

目的 筛选稳定表达野生型PTEN基因的食管鳞癌细胞株EC9706.方法 提取胎盘总RNA,设计引物,PCR扩增人野生型PTEN基因,经测序鉴定后,连接于pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建pcDNA3.1-PTEN,用脂质体介导的方法将其转染EC9706.而后加抗生素G418筛选稳定表达株,用RT-PCR方法检测稳定表达株PTEN基因的mRNA水平,通过绘制生长曲线观察细胞生长情况.结果 PCR产物的电泳结果显示,在1 500bp左右有一明显亮带,测序结果与GenBank上PTEN序列完全一致;稳定表达PTEN基因的细胞株RT-PCR结果显示,PTEN的mRNA水平比对照细胞株相比明显升高;生长曲线结果显示,转染后的细胞生长速度明显减慢.结论 所扩基因为野生型PTEN基因,所构建的载体为野生型PTEN基因真核表达载体,并筛选出PTEN基因稳定表达的食管鳞癌细胞株.