心肌特异性α-actin启动子重组腺病毒的构建及其鉴定

• 作者: 华进联 孙永科 杨玉艾 窦忠英
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒载体 α-肌动蛋白启动子 胚胎干细胞
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 动物科学与动物医学
• 页码范围: 1-5,10
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4394字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-9387.2007.08.001

摘要

为了探讨心肌肌动蛋白(α-actin)基因启动子的心肌组织特异性及其表达活性,构建了心肌组织靶向性表达的基因载体,应用PCR从pEGFP-N1-α-actin-P质粒中克隆出α-actin启动子片段,将其插入到切除CMV启动子的腺病毒穿梭载体pAdTrack中,构建出pAdTrack-actin重组穿梭载体,经酶切和测序鉴定正确后用Pme Ⅰ线性化,与含有腺病毒骨架DNA的pAdEasy-1质粒在BJ5183大肠杆菌细胞中同源重组成新的重组体pAd-easy-actin,抽提重组体DNA,经Pac Ⅰ酶切回收后以脂质体法转染人胚肾细胞株HEK293,包装出完整腺病毒pAd-actin进行PCR检测,并应用蚀斑形成试验测定病毒滴度.结果显示,重组腺病毒中含有α-actin启动子片段,病毒滴度为7×107pfu/mL.表明含心肌α-actin启动子的重组腺病毒pAd-actin构建成功.