抗大肠癌siRNA载体上报告基因的构建与鉴定

• 作者: 刘力华 刘立民 孙志奇 宋燕 张春福 谭岩 陈丽
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 大肠肿瘤 绿色荧光蛋白 pSilencer3.1-H1 DNA,重组
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 技术交流
• 页码范围: 392-395
• 页数: 4页
• 分类号: R735.3
• 字数: 3261字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2007.02.055

摘要

目的:在siRNA载体上构建带绿色荧光蛋白(GFP)的报告基因,此重组质粒用于抗大肠癌的进一步研究.方法:用分子克隆技术构建绿色荧光蛋白基因与真核细胞表达载体pSilencer3.1-H1的重组体(pSilencer3.1-H1/GFP),并用脂质体介导的转染技术,将其导人人大肠癌细胞.结果:GFP基因的PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳,可见目的片段大小与预期一致.重组pGEM-GFP克隆插入序列经测序鉴定结果与GenBank报道一致.重组质粒pSilencer3.1-H1/GFP用NruⅠ和PstⅠ双酶切后可见2条电泳带,3 500 bp为pSilencer3.1-H1质粒片段,700 bp左右为GFP片段,以PCR分析此插入序列也获得约700 bp的泳带,与预期一致.此重组质粒转染大肠癌细胞后,在倒置荧光显微镜下可见视野内发绿色荧光的细胞.结论:成功构建了含报告基因的重组质粒pSilencer3.1-H1/GFP,此重组质粒可进一步用于抗大肠癌的研究,方便转染效率的直观观察,有利于流式细胞仪的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭岩	吉林大学第一医院中心实验室	135	608	9.0	17.0
2	刘力华	吉林大学第一医院中心实验室	51	162	6.0	9.0
3	宋燕	吉林大学中日联谊医院基本外科	58	249	9.0	11.0
4	孙志奇	大庆油田总医院集团心内科	16	55	5.0	6.0
5	刘立民	吉林大学中日联谊医院泌尿外科	12	95	4.0	9.0
6	张春福	吉林大学中日联谊医院基本外科	7	22	3.0	4.0
7	陈丽	大庆油田总医院集团心内科	10	29	2.0	5.0