冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白与不同细胞受体结合竞争试验

• 作者: 何畅 吴广谋 岳玉环 张国利 朱平
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 医学
• 关键词: LHRH-PE40 放射性配基结合分析 亲和力
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 应用基础研究
• 页码范围: 583-587
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 3988字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2007.05.006

摘要

目的 为了验证重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(LHRH-PE40)对癌细胞的靶向性,对LHRH-PE40进行125I标记,并进行了与多种细胞受体结合试验和竞争试验.为该药物的导向治疗提供可靠的依据.方法 利用体外细胞培养方法将人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo,人T细胞淋巴瘤Hut102,人白血病细胞系Jurket,狗肾细胞系DK 5种细胞系,分别大量培养至单层,收获细胞,破碎,制备细胞膜.同时制备鼠肺组织的细胞膜进行试验.利用125I标记的LHRH-PE40与不同细胞膜进行放射性配基结合分析,以及与LHRH竞争结合分析.确定这些细胞表面有无LHRH受体,并用Scatchard作图方法计算出其亲和常数及最大结合量.结果 小鼠肺组织细胞膜、人T细胞淋巴瘤Hut102、人白血病细胞系Jurket、狗肾细胞系DK未见配基-受体特异性结合及竞争结果;而人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo与LHRH-PE40的结合竞争符合特异性配基-受体结合、竞争特性.其中LHRH-PE40与Lovo细胞的Kd=10.6±2.33 nmol/L,Bmax=345±7.59 pmol/mg ;与BGC-823细胞的Kd=37.82±1.42 nmol/L,Bmax=475±17.86 pmol/mg.结论 受试的6种细胞膜蛋白中正常细胞(鼠肺、狗肾)和两种肿瘤细胞(Jurket、Hut102)表面无LHRH受体表达.而结肠癌和胃癌肿瘤细胞表面存在LHRH受体的表达.另外本试验还证实了重组毒素LHRH-PE40保留了天然LHRH与其受体结合的高亲和力.