重组人胰腺α-淀粉酶在毕赤酵母菌中的分泌性表达

• 作者: 夏铁安 徐国宾 王天成
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 毕赤酵母 基因表达 人胰腺α-淀粉酶
• 年，卷（期）: 2007,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3492-3495
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4901字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2007.22.009

摘要

目的:构建人胰腺α-淀粉酶(HPA)真核表达载体并在毕赤酵母中进行表达.方法:从人胰腺组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,RT-PCR法扩增HPA基因,将其插入到酵母分泌性表达质粒pPIC9中,筛选得到正确序列的重组质粒pPIC9-HPA,用该质粒转化毕赤酵母菌GS115,PCR方法筛选阳性克隆,摇瓶培养、0.5%甲醇诱导重组HPA分泌性表达,测定培养上清中的淀粉酶活力;重组HPA用冷乙醇-糖原亲和沉淀、疏水层析纯化并以SDS-PAGE电泳和Western blot方法鉴定.结果:成功构建了重组HPA真核酵母表达载体,重组质粒酶切和核酸测序结果与预期-致,显示HPA基因正确插入质粒pPIC9中;以pPIC9-HPA转化毕赤酵母菌GS115,实现了重组HPA在毕赤酵母菌分泌性表达;重组HPA经纯化后鉴定具天然HPA相同的免疫原性,其对可溶性淀粉酶的水解产物和酶动力学分析与天然HPA相近.结论:成功实现了HPA在毕赤酵母真核表达系统中的分泌性表达,重组HPA与天然HPA具有相似的催化和酶动力学性质.本实验为下一步作为临床HPA测定标准品的研制准备了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐国宾	北京大学第一医院检验科	130	2817	24.0	49.0
2	夏铁安	北京大学第一医院检验科	50	1046	17.0	31.0
3	王天成	北京大学第三医院检验科	48	352	12.0	15.0