人谷胱甘肽硫转移酶P1基因真核表达体系的构建及在A549细胞中的表达

• 作者: 刘新奎 吴逸明 王琳
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 谷胱甘肽硫转移酶P1 真核表达 基因 转染
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 42-45
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2190字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2008.01.014

摘要

目的:构建人谷胱甘肽硫转移酶P1(GSTP1)基因的真核表达载体,转染A549细胞,实现其真核表达.方法:以本室保存的重组质粒(pMAL-C2x-GSTP1)为模板;根据GSTP1全基因组序列设计GSTP1 PCR引物,扩增GSTP1片段;限制性内切酶酶切PCR产物和pcDNA3.0空质粒,T4 DNA连接酶连接酶切产物,重组质粒转化E.coli DH5α;提取质粒经酶切、PCR和序列测定后,用Primer Premier 5.0进行序列分析.测序正确的重组质粒和空质粒用脂质体转染法分别转染A549细胞,经G418筛选,获得阳性克隆,运用RT-PCR、Western Blot等技术进行鉴定,同时观察细胞的生长变化.结果:质粒酶切电泳和特异PCR均可见0.63 kb的目的基因片段,测序结果与GenBank中人GSTP1序列一致,基因登录号:BC010915.成功转染A549细胞,实现表达,获得GSTP1蛋白.结论:成功构建pcDNA3.0-GSTP1真核表达细胞系,为进一步研究其在解毒致癌原、预防肺癌发生及其与职业性肺癌的关系奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴逸明	郑州大学公共卫生学院职业卫生与职业病学教研室	201	1078	14.0	20.0
2	王琳	郑州大学公共卫生学院职业卫生与职业病学教研室	102	316	9.0	13.0
3	刘新奎	郑州大学第一附属医院信息科	38	166	8.0	11.0