重组人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶287三个功能性突变体的构建、表达及活性比较

• 作者: YUAN Ling-Min ZENG Su 陈静
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶 突变蛋白质类
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 274-283
• 页数: 10页
• 分类号: R963
• 字数: 5167字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2008.04.006

摘要

目的 构建人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGT)287重组酶的3个功能性突变体UGT2B7 *71S(A71S,211G>T),UGT2B7 *2(H268Y,802C>T)和UGT2B7 *5(D398N,1192G>A),以进一步研究该酶野生型和其突变体在对底物作用过程中的功能差异. 方法 应用细菌/杆状病毒系统,将构建的pFastBac-UGT2B7 *71S,pFastBac-UGT2B7 *2和pFastBac-UGT2B7 *5重组质粒转化E.coli DH10Bac大肠杆菌,通过转座作用获得各自的重组粘粒(bac-mid),然后将其转染草地夜蛾(Sf)9细胞后,产生重组杆状病毒.这些病毒再感染Sf9细胞,即可获得野生型UGT2B7 *1及其突变体的重组酶.野生型及突变体酶的活性以7-羟基4-三氟甲基香豆素(7-HFC)为底物,用荧光法测定并分析比较. 结果 利用杆状病毒/昆虫细胞系统,成功地构建人UGT2B7重组酶的3个功能性突变体.UGT2B7 *1对7-HFC的Km值为(0.331±0.018)mmol·L-1,Vmax值为(2.14±0.04)μmol·min-1·g-1蛋白;UGT2B7 *71S对7-HFC的Km值为(0.260±0.026)mmol·L-1,Vmax值为(1.36±0.05)μmol·min-1·g-1蛋白;UGT2B7 *2对7-HFC的Km值为(0.53±0.06)mmol·L-1,Vmax值为(9.5±0.5)μmol·min-1·g-1蛋白;UGT2B7 *5对7-HFC的Km值为(0.59±0.05)mmol·L-1,Vmax值为(7.52±0.28)μmol·min-1·g-1蛋白. 结论 应用细菌/杆状病毒系统,成功构建了UGT2B7的3个功能性突变体,这些突变体可进一步用于对其他底物的代谢活性比较.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈静	浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室	60	459	12.0	20.0
2	YUAN Ling-Min	浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室	1	1	1.0	1.0
3	ZENG Su	浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室	1	1	1.0	1.0