RNA干扰介导的MN9D细胞中α-synuclein表达抑制及其对细胞活力的影响

• 作者: 刘冬梅 杨慧 王浩 赵春礼 赵焕英 金玲
• 来源期刊: 神经科学通报（英文版）
• 学科: 生物学
• 关键词: α-synuclein RNA干扰 帕金森病
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 页码范围: 96-104
• 页数: 9页
• 分类号: Q71
• 字数: 1016字
• 语种: 英文

摘要

目的 使用载体介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)方法抑制MN9D细胞中的α-synuclein基因表达,并检测其对细胞增殖和活力的影响.方法 在α-synuclein的开放读码区选择两段19个核苷酸的片断,并选择一段与小鼠基因无同源性的阴性对照序列,分别设计合成单链寡核苷酸,退火融合成双链寡核苷酸.将双链寡核苷酸克隆入pENTR/H1/TO质粒载体,鉴定正确后,转染MN9D细胞,通过筛选获得稳定的细胞克隆.使用RT-PCR、 Real-time PCR、免疫细胞化学染色和Western blot方法检测细胞内的α-synuclein的表达水平,鉴定RNAi的效率.利用生长曲线和MTT法分别检测比较各组细胞的增殖和活力.结果 转染pSH2/α-SYN的细胞与正常和转染pSH/CON的MN9D细胞相比,α-synuclein mRNA及蛋白水平均明显减少;而转染pSH1/α-SYN的细胞α-synuclein mRNA及蛋白水平与两组对照细胞没有明显差别.抑制α-synuclein表达不影响细胞增殖,但可以降低细胞活力.结论 结果表明,SH2/α-SYN是有效的小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)序列,通过载体介导的RNAi方法可以有效抑制MN9D细胞中的α-synuclein表达,这为进一步研究α-synuclein蛋白的生理功能及其在帕金森病(Parkinson's disease, PD)发病中的作用提供了良好的细胞模型;α-synuclein在维持MN9D细胞活力中起到重要作用,α-synuclein功能缺失会导致细胞直接或间接的损伤.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨慧	首都医科大学北京神经科学研究所	124	633	13.0	17.0
2	刘冬梅	首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室	44	223	9.0	13.0
3	赵焕英	首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室	55	178	7.0	11.0
4	金玲	首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室	30	204	9.0	13.0
5	王浩		35	158	7.0	10.0
6	赵春礼	首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室	45	182	8.0	11.0