甲型流感病毒DNA疫苗双表达载体的构建及表达

• 作者: 匡科伟 宋泽民 张雪梅 彭丽萍 徐建国 戚凤春 汪春义 贾媛 赵大鹏 赵晓红 陈云波
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒A型 M2基因 DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 65-68
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1|Q78
• 字数: 3138字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2008.01.017

摘要

目的:构建含有甲型流感病毒M2基因与GM-CSF基因的DNA疫苗双表达载体,为研究甲型通用流感疫苗奠定基础.方法:将甲型流感病毒(H1N1)接种鸡胚后收获尿囊液,提取流感病毒总RNA,RT-PCR法扩增M2基因;将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因插入到质粒pVAXI多克隆位点,再将M2基因和GM-CSF基因依次克隆到IRES的上、下游多克隆位点,构建出甲型流感病毒双表达载体pMIG,酶切鉴定后测序;脂质体法转染COS7细胞并检测目的蛋白的表达.结果:成功扩增出M2基因(约300 bp)、IRES基因(约580 bp)和GM-CSF基因(约400 bp),酶切鉴定结果表明构建出甲型流感病毒双表达载体pMIG,Western blotting检测证明流感病毒M2蛋白的表达.结论:成功构建出流感病毒DNA疫苗双表达载体pMIG.