大鼠凝血因子Ⅶ EGFP-EGF1融合蛋白的表达及其结合功能初步研究

• 作者: 张迎红 方峻 梅恒 王华芳 胡豫 郭涛 魏文宁
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 凝血因子Ⅶ 组织因子 主动脉内皮细胞 重组融合蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 出血与血栓
• 页码范围: 181-184
• 页数: 4页
• 分类号: R364.15
• 字数: 2853字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2137.2008.01.035

摘要

本研究通过融合蛋白EGFP-EGF1的表达,探讨大鼠凝血因子Ⅶ上EGF1片段与组织因子(TF)的结合功能.用RT-PCR方法自大鼠肝脏组织获得EGF1编码区基因并将其插入EGFP原核表达载体中,构建pET28aEGFP-EGF1融合蛋白表达载体;将该重组质粒转化大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达EGFP-EGF1融合蛋白;采用亲和层析方法Ni柱纯化融合蛋白,将融合蛋白作用于经脂多糖刺激表达TF的大鼠血管内皮细胞;通过荧光显微镜及流式细胞术观察和检测融合蛋白与细胞结合情况.结果表明:EGFP-EGF1在转化的大肠杆茵中获得高效表达并成功纯化,SDS-PAGE证实分子量约为36kD.荧光显微镜及流式细胞术检测显示该融合蛋白能与内皮细胞膜上的TF结合.结论:大鼠凝血因子Ⅶ上EGF1区可介导FⅦ与TP特异性结合,从而可能为分子靶向抗栓治疗研究提供部分基础.