分泌性HIV-1Nef-EGFP融合蛋白表达载体的构建与鉴定

• 作者: 卢春 朱小飞 郝婷婷 马新廷
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 分泌性表达载体 人类免疫缺陷病毒I型负性调节因子 增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 14-18
• 分类号: R392.11
• 字数: 3732字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2012.01.003

摘要

目的:构建含有人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type I,HIV-1)负性调节因子(negative regulation factor,Nef)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的重组融合蛋白分泌性表达载体,并检测该融合蛋白在真核细胞中的表达及其在培养上清中分泌情况,为进一步研究Nef功能奠定基础.方法:利用PCR扩增出HIV-1 Nef和EGFP 基因,插入到分泌性表达载体pSecTag2B中.构建的pSecTag2B-Nef-EGFP融合蛋白表达质粒,转染293T细胞,荧光显微镜下观测细胞中Nef-EGFP融合蛋白的表达.收集细胞及上清液,蛋白质印迹和ELISA法分别检测Nef-EGFP融合蛋白的表达及其分泌.结果:限制性内切酶酶切鉴定和核酸序列测定证实,成功构建了含有 Nef-EGFP 基因的分泌性表达载体,该质粒转染293T细胞后,蛋白质印迹法能够检测到Nef-EGFP融合蛋白的表达条带,ELISA法检测上清液中目的蛋白分泌量为1.7 ng/ml.结论:成功构建含有Nef-EGFP的融合蛋白表达质粒,融合蛋白Nef-EGFP在293T细胞中获得表达,并能分泌到胞外.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春	南京医科大学微生物与免疫学系	92	236	7.0	9.0
2	朱小飞	南京医科大学微生物与免疫学系	4	2	1.0	1.0
3	马新廷	南京医科大学微生物与免疫学系	2	2	1.0	1.0
4	郝婷婷	南京医科大学微生物与免疫学系	3	2	1.0	1.0