抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达

• 作者: 代维 刘静 文雪 朱慧芬 沈关心 袁晓梅 雷萍 黄鹤
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 转铁蛋白受体 单链抗体 重叠延伸PCR
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 936-939
• 页数: 4页
• 分类号: Q816
• 字数: 3233字
• 语种: 中文

摘要

目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达.方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamH Ⅰ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性.结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合.结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈关心	华中科技大学同济医学院免疫学系	114	554	12.0	18.0
2	朱慧芬	华中科技大学同济医学院免疫学系	45	154	8.0	9.0
3	刘静	华中科技大学同济医学院免疫学系	74	299	10.0	13.0
4	代维		4	2	1.0	1.0
5	雷萍	华中科技大学同济医学院免疫学系	14	14	2.0	3.0
6	文雪	华中科技大学同济医学院免疫学系	4	24	2.0	4.0
7	袁晓梅	华中科技大学同济医学院免疫学系	4	48	3.0	4.0
8	黄鹤	华中科技大学同济医学院免疫学系	1	1	1.0	1.0