抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定

• 作者: 刘静 姚欣欣 朱慧芬 沈关心 沈昕 潘兴飞 胡军 许海霞 陈广生 雷萍
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 转铁蛋白受体 单链抗体 次级淋巴组织趋化因子 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 832-834,843
• 页数: 4页
• 分类号: Q816
• 字数: 2756字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白.方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因.以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a+scFv载体和PCR产物,连接后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TfR scFv-SLC融合蛋白的表达.SDS-PAGE、Western blot分析TfR scFv-SLC的表达特性.FCM测定scFv-SLC与肿瘤细胞结合活性.结果:EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定可见约350 bp的小片段,与SLC的理论值相符,DNA测序结果表明含有TfR scFv-Linker-SLC序列,表明pET28a+scFv-SLC融合基因表达载体构建成功.IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约41 kD的条带,符合scFv-SLC理论值.FCM结果显示TfR scFv-SLC可与MCF-7、HepG2细胞结合,且结合的阳性率较TfR scFv有所提高.结论:成功构建与表达scFv-SLC融合蛋白,且能与MCF7、HepG2等细胞特异性结合.