人源抗HBsAg scFv与重组复合干扰素融合蛋白的高效表达及活性鉴定

• 作者: 刘顺爱 工藤俊雄 徐道振 浅野龙太郎 熊谷泉 王学
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HBsAg 人源单链抗体 cIFN 融合蛋白 原核表达 活性
• 年，卷（期）: 2004,（9）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 629-632,638
• 页数: 5页
• 分类号: R371.4
• 字数: 4081字
• 语种: 中文

摘要

目的:制备人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)单链抗体(scFv)与重组复合干扰素(consensus interferon,cIFN)的融合蛋白,并鉴定其活性.方法:把人源抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白的表达载体pRA-cIFNscFv转化到大肠杆菌菌株BL21之后大量表达抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白.SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白,经纯化并变性复性包涵体蛋白后用ELISA、流式细胞仪、MTS非放射性活细胞比色定量法及HBsAg血凝抑制试验等进行融合蛋白的抗HBsAg抗体活性和干扰素活性测定.结果:SDS-PAGE和Western blotting结果显示,抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白在BL21大肠杆菌中大量表达,表达量超过10 mg/L培养基;ELISA和流式细胞仪结果显示,所表达的目的蛋白具有抗HBsAg 和IFNα的免疫活性,且特异性良好;MTS和HBsAg血凝抑制试验结果显示,融合蛋白具有明显的PLC/PRF/5细胞增殖抑制活性和HBsAg分泌抑制活性,表明所获得的抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白具有抗HBV病毒活性和HBV感染细胞增殖抑制活性.结论:用基因工程方法成功制备了人源抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白,此融合蛋白具有抗HBsAg抗体活性和IFNα活性,有待深入探讨此融合蛋白的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐道振		72	1273	18.0	34.0
2	刘顺爱		19	162	8.0	12.0
3	浅野龙太郎		1	3	1.0	1.0
4	王学		1	3	1.0	1.0
5	熊谷泉		1	3	1.0	1.0
6	工藤俊雄		1	3	1.0	1.0