全人源scFv-Fc真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 刘佳佳 叶迎春 年四季 王栩 袁青 高燕
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: scFv-Fc CHO细胞 真核表达 IL-33
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 226-229
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3026字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.02.019

摘要

目的:构建全人源抗IL-33 scFv-Fc重组载体,转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),表达并鉴定融合抗体蛋白.方法:RT-PCR扩增人IgG1 Fc段并捅入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1/Fc重组载体;将合成的信号肽(SP)序列插入重组质粒pcDNA3.1/Fc,构建重组pcDNA3.1/SP-Fc通用载体;最后将本实验室前期筛选的抗IL-33 scFv插入重组质粒pcDNA3.1/SP-Fc中,构建重组pcDNA3.1/SP-scFv-Fc载体,测序正确后转染CHO细胞.RT-PCR 、Westem blot检测目的基因的转录及表达.结果:重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小为1 560 bp左右.转染CHO细胞后,RT-PCR结果显示目的基因在CHO细胞中成功转录,Western blot显示表达的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清发生特异性免疫反应.结论:成功构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,以便于后续在CHO细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘佳佳	泸州医学院基础医学院	54	331	9.0	16.0
2	高燕	泸州医学院基础医学院	26	137	5.0	11.0
3	王栩	泸州医学院基础医学院	24	107	4.0	10.0
4	叶迎春	泸州医学院基础医学院	25	114	6.0	9.0
5	年四季	泸州医学院基础医学院	12	50	4.0	6.0
6	袁青	泸州医学院基础医学院	15	54	5.0	6.0