抗TfR单链抗体-AP融合蛋白的构建、表达与鉴定

• 作者: 刁智娟 刘静 沈关心 沈昕 肖代雯 邢薇 陶娟 雷萍 黄宇
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 转铁蛋白受体 单链抗体 碱性磷酸酶 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 260-262
• 页数: 3页
• 分类号: Q81
• 字数: 2070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2006.04.004

摘要

目的 构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体--碱性磷酸酶(AP)融合蛋白.方法 用SfiⅠ和Not Ⅰ分别酶切抗转铁蛋白受体scFv表达质粒pUC19/119,获得scFv基因,直接亚克隆到表达载体pDAP2中,在TG1菌中表达scFv-AP融合蛋白,SDS-PAGE分析scFv-AP的分子量,酶免疫测定鉴定其抗体和酶活性.结果 scFv-AP融合蛋白表达载体经scFv特异性引物PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳可见约700 bp条带,符合scFv基因理论值大小,IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约为75ku的蛋白条带,符合scFv-AP融合蛋白分子量的理论值大小,直接细胞ELISA测定证明表达产物scFv-AP融合蛋白具有结合人TfR和AP活性的双重功效.结论 抗人scFv-AP融合蛋白表达载体构建成功,表达产物具有结合人TfR和AP活性的双重功效,为其临床检测应用奠定了基础.