抗人γ-精浆蛋白VH单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析

• 作者: 武国军 王智 王栋 王禾 袁建林 郝晓柯
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 人γ-精浆蛋白 单域抗体 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2001,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 197-200
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2001.03.002

摘要

目的扩增出抗人γ-精浆蛋白(γ-Sm)单克隆抗体(mAb)的重链可变区(VH)单域抗体基因，并进行原核表达及空间构象分析。方法从分泌抗γ-Sm mAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA，经RT-PCR扩增VH单域抗体基因，将其克隆到融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中进行表达，并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果VH单域抗体基因全长363 bp，含起始码和终止码。将其克隆到pGEX-4t-1内，转化大肠杆菌DH5α，获得高效表达，表达量占全菌总蛋白质的38％，以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后，用谷胱甘肽(GST)亲和色谱纯化，再经凝血酶水解获得抗γ-SmVH单域抗体。竞争结合抑制实验证明，该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示，该抗体具有完整的抗原结合位点。结论构建成功抗γ-Sm的VH单域抗体，为进一步临床应用奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王禾	第四军医大学西京医院泌尿外科	231	1042	15.0	20.0
2	武国军	第四军医大学西京医院泌尿外科	100	426	11.0	14.0
3	郝晓柯	第四军医大学唐都医院中心实验室	322	1751	18.0	23.0
4	王栋	第四军医大学西京医院泌尿外科	33	135	7.0	10.0
5	王智	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	21	51	5.0	6.0
6	袁建林	第四军医大学西京医院泌尿外科	169	598	11.0	15.0